Efecto de la combinación de bases nutritivas con el inhibidor sobre la recuperación de salmonelas / Effect of combining nutrient bases and inhibitor on recovery of Salmonella

INTRODUCCIÓN: las salmonelas son las causantes más frecuentes de enfermedades transmitidas por alimentos a nivel mundial. El caldo selenito cistina es un medio de enriquecimiento selectivo utilizado para la recuperación de especies de salmonelas en muestras de alimentos, aguas, heces y otros materiales de importancia sanitaria. OBJETIVO: evaluar la combinación de bases nutritivas obtenidas por métodos originales con el selenito de sodio para garantizar la adecuada recuperación de especies de salmonelas en el caldo selenito cistina. MÉTODOS: se realizó un estudio comparativo con diferentes bases nutritivas, que evaluó la promoción de crecimiento bacteriano de seis cepas de Salmonella y Shigella. Se prepararon dos variantes y se inocularon los microorganismos seleccionados a una concentración aproximada de 3 × 108 unidades formadoras de colonia por mililitro. El incremento de la biomasa se determinó a través de la medición de la absorbancia en un espectrofotómetro a 640 nanómetros cada una hora. Se comparó el comportamiento del medio caldo selenito cistina formulado por ingredientes con el caldo selenito cistina de Merck frente a los microorganismos de interés. Se determinó productividad y selectividad del medio de cultivo. RESULTADOS: la variante que contiene la mezcla de bases nutritivas (peptona bacteriológica Z, peptona de soya e hidrolizado enzimático de caseína) facilitó una mejor recuperación de las cepas ensayadas, mostró diferencias significativas (p< 0,05) con respecto a la variante que contiene solo hidrolizado enzimático de caseína. El medio experimental que contenía la mezcla de bases nutritivas con el selenito de sodio, mostró una recuperación de Salmonella a bajas concentraciones, similar al de referencia e inhibió mejor Escherichia coli a bajas concentraciones. A altas concentraciones ninguno de los dos medios pudo inhibir el crecimiento de E. coli. La productividad para ambos medios, resultó satisfactoria en el intervalo de 0,1 a 1, al igual que la selectividad con un valor aproximado de 3. CONCLUSIONES: la combinación de bases nutritivas originales con el selenito de sodio permitió una adecuada recuperación de las especies de salmonelas.

INTRODUCTION: Salmonella are the most common causes of food-borne disease worldwide. Selenite cystine broth is a selective enrichment medium used for the recovery of Salmonella species in samples of food, water, feces and other materials of clinical importance. OBJECTIVE: Evaluate the combination of nutrition bases obtained by original methods and sodium selenite to ensure appropriate recovery of Salmonella species in selenite cystine broth. METHODS: A comparative study was conducted with various nutrition bases to evaluate the fostering of bacterial growth in six strains of Salmonella and Shigella. Two variants were prepared and the microorganisms selected were inoculated at an approximate concentration of 3 × 108 colony-forming units per milliliter. Absorbance was measured with a 640 nanometer spectrophotometer every hour to determine biomass increase. Behavior of the selenite cystine broth medium formulated by ingredients was compared with that of Merck cystine selenite broth in the presence of the microorganisms of interest. Determination was performed of the productivity and selectivity of the culture medium. RESULTS: The variant containing the mixture of nutrient bases (bacteriological peptone Z, soybean peptone and casein enzymatic hydrolysate) facilitated better recovery of the strains tested, with significant differences (p< 0.05) with respect to the variant containing casein enzymatic hydrolysate alone. The experimental medium containing the mixture of nutrient bases and sodium selenite displayed Salmonella recovery at low concentrations in a manner similar to the reference medium and inhibited Escherichia coli more efficiently at low concentrations. At high concentrations neither medium was able to inhibit the growth of E. coli. Productivity was satisfactory in both media, ranging between 0.1 and 1, and so was selectivity, which reached an approximate value of 3. CONCLUSIONS: The combination of original nutrition bases and sodium selenite allowed appropriate recovery of Salmonella species.

Efecto de una combinación nutritiva y selectiva con sustratos cromogénicos para diagnóstico de cocos grampositivos / Effect of a selective nutrient combination of chromogenic substrates for diagnosis of Grampositive cocci

INTRODUCCIÓN: la reemergencia de infecciones por bacterias grampositivas y el aumento de su patogenicidad, requiere de un diagnóstico microbiológico rápido y certero. En BioCen se desarrolló una composición cromogénica para el aislamiento, cultivo y diferenciación rápida y presuntiva de microorganismos grampositivos por medio de reacciones cromogénicas específicas, donde las bacterias gramnegativas se encuentran inhibidas de manera parcial o total. OBJETIVO: evaluar el efecto de la combinación de bases nutritivas, inhibidores selectivos y sustratos cromogénicos para aumentar la selectivad y capacidad diferencial para especies de los géneros Enterococcus, Streptococcus y Staphylococcus de importancia clínica. MÉTODOS: se evaluaron 21 cepas microbianas de la American Type Culture Collection y 24 aislamientos clínicos de Streptococcus, Enterococcus y Staphylococcus y otros microorganismos gramnegativos. Se evaluaron diferentes combinaciones de bases nutritivas, acetato de talio, ácido nalidíxico y sustratos cromogénicos para la promoción del crecimiento y diferenciación de las bacterias grampositivas. Se evaluó la funcionalidad microbiológica y se le determinaron los parámetros de calidad diagnóstica. RESULTADOS: la combinación de bases nutritivas permitió el desarrollo de los microorganismos grampositivos, en 24 h y su diferenciación por reacciones cromogénicas específicas. El crecimiento de los microorganismos gramnegativos fue inhibido por la acción del acetato de talio (0,014 g·L-1) y ácido nalidíxico (0,008 g·L-1), excepto Proteus mirabilis y Pseudomonas aeruginosa, cuyas características morfológicas no interfieren en la diferenciación de los microorganismos diana. La sensibilidad, especificidad y exactitud diagnósticas fueron del 100 %. CONCLUSIÓN: la combinación de las bases nutritivas, los inhibidores selectivos y los sustratos cromogénicos permitió el desarrollo y diferenciación de especies de los microorganismos evaluados. La inoculación en el medio cromogénico de microorganismos diana y no diana y la diferenciación de aquellas cepas donde se detectó color similar de las colonias por medio de pruebas complementarias rápidas, le confirió al medio elevadas sensibilidad, especificidad y exactitud diagnóstica.

INTRODUCTION: reemergence of Grampositive bacteria infections and the rise of their pathogenicity require a quick and accurate microbiological diagnosis. BioCen has developed a chromogenic composition for isolation, culturing and rapid and presumptive differentiation of gram-positive microorganisms through specific chromogenic reactions in which the inhibition of gramnegative bacteria is partial or total. OBJECTIVE: to evaluate the effect of a combination of nutrient bases, selective inhibitors and chromogenic substrates to increase the selectivity and differential capacity to detect Enterococcus, Streptococcus and Staphylococcus species of clinical importance. METHODS: twenty one microbial strains from the American Type Culture Collection and 24 clinical isolates of Enterococcus, Streptococcus and Staphylococcus and of other gramnegative microorganisms were evaluated. Various combinations of nutrient bases, thallium acetate, nalidixic acid and chromogenic substrates were also assessed for the promotion, growth and differentiation of grampositive bacteria. The microbiological functionality was evaluated whereas the diagnostic quality parameters were determined. RESULTS: the combination of nutrient bases allowed the development of grampositive microorganisms in 24 hours and their differentiation through specific chromogenic reactions. The growth of gramnegative microorganisms was inhibited by the thallium acetate (0.014 g·L-1) and nalidixic acid (0,008 g·L-1) except for Proteus mirabilis and Pseudomonas aeruginosa whose morphological characteristics do not interfere with differentiation of target microorganisms. Sensitivity, specificity and accuracy for diagnosis were 100 %. CONCLUSIONS: the combination of nutrient bases, selective inhibitors and chromogenic substrates allowed the development and differentiation of the evaluated microorganism species. The inoculation of target and non-target microorganisms in the chromogenic medium and the differentiation of those strains where a similar color of the colonies was detected by means of supplementary rapid tests provided the medium with high diagnostic sensitivity, specificity and accuracy.

Combinaciones de bases nutritivas empleadas en el desarrollo del medio caldo nitrato / Nutritional bases combinations used in the development of nitrate broth medium

INTRODUCCIÓN: el medio caldo Nitrato es utilizado en los laboratorios de microbiología clínica como prueba bioquímica para la identificación de enterobacterias por la capacidad que tienen estos microorganismos para reducir los nitratos a nitrito. OBJETIVO: evaluar diferentes combinaciones de bases nutritivas destinadas al desarrollo del medio de cultivo. MÉTODOS: se seleccionó como material biológico un conjunto de cepas certificadas y aisladas pertenecientes a especies representativas de varios géneros de la familia de Enterobacteriaeceae. Se diseñaron cinco variantes y se utilizó como bases nutritivas la peptona de gelatina y el extracto de carne, en diferentes combinaciones y concentraciones, para determinar el incremento de absorbancia en el tiempo como indicador de la densidad microbiana y se calculó la velocidad de crecimiento. Se evaluó la capacidad funcional del medio de cultivo por la habilidad de las especies de reducir o no el nitrato a nitrito. RESULTADOS: la mejor combinación de bases nutritivas correspondió a la de mayor concentración de peptona de gelatina (10 g/L) y extracto de carne (3 g/L). La evaluación organoléptica y fisicoquímica del medio de cultivo mostró características satisfactorias para este tipo de producto. Se comprobó la reducción satisfactoria del nitrato a nitrito, por los microorganismos empleados como control positivo. CONCLUSIONES: el medio de cultivo caldo nitrato desarrollado, cumple con los requisitos de calidad y su funcionalidad microbiológica y permite la caracterización de especies bacterianas que poseen la capacidad de reducir los nitratos a nitritos.

INTRODUCTION: the nitrate broth culture medium is used in clinical microbiology laboratories as a biochemical test for the identification of Enterobacteriaceae by the ability of these microorganisms to reduce nitrate to nitrite. OBJECTIVE: to evaluate different combinations of nutritive bases for the development of the culture medium. METHODS: certificed strains were selected as biological test material. The strains belong to different generu of the Enterobactericiae family. Five variants were designed with gelatin peptone and meat extract as nutrient bases at different concentrations and combinations, the growth rate was calculated by measuring the increase in absorbance over time as an indicator of microbial density. The functionality of the culture medium was evaluated by the ability of tested bacteria or reduce nitrate to nitrite RESULTS: the best combination of nutritive bases contained the highest concentration of gelatin peptone (10 g/L) and beef extract (3 g/L). Physicochemical and sensory evaluation of the culture medium showed results characteristic for this type of product. Reductions of nitrate to nitrite were observed for all tested microorganisms choosed as the positive control. CONCLUSIONS: the nitrate broth culture medium developed complies the quality requiment and its microbiological functionality allows the characterization of bacterial species by the ir ability to reduce nitrate to nitrite

Evaluación de la peptona papaínica de corazón de res para el enriquecimiento selectivo de Enterococcus / Evaluation of beef heart papainic peptone for selective enrichment of Enterococcus

Introducción: el control microbiológico de aguas y alimentos ha motivado el desarrollo de medios de cultivo selectivos capaces de detectar Enterococcus, los cuales necesitan de una fuente de energía apropiada para garantizar la recuperación de estos. Objetivos: comparar diferentes bases nutritivas elaboradas a partir de productos y subproductos alimenticios según su capacidad de promoción de crecimiento del género Enterococcus y evaluar la exactitud del medio de cultivo caldo azida dextrosa. Métodos: para el ensayo se seleccionaron 80 cepas de diferentes géneros. Se prepararon dos variantes experimentales del caldo azida dextrosa (una tamponada) y se inocularon los microorganismos seleccionados a una concentración estandarizada. El incremento de la biomasa se determinó midiendo la densidad óptica en un espectrofotómetro a 640 nm cada una hora. La evaluación microbiológica del medio de cultivo se realizó utilizando diferentes géneros microbianos a distintas concentraciones. Se determinó la sensibilidad, especificidad, exactitud diagnóstica y relativa y el índice Kappa del diagnosticador. Como medio de referencia se utilizó el caldo azida glucosa proveniente de la firma comercial Merck (Alemania). ..

Introduction: microbiological control of water and food has motivated the development of selective culture media capable of detecting Enterococcus, which need an appropriate source of energy to ensure the recovery of microorganisms. Objectives: compare different nutrient bases produced from food products and by-products according to their growth promotion capacity for the genus Enterococcus, and evaluate the accuracy of dextrose azide broth culture medium. Methods: eighty strains of different genera were selected for the test. Two experimental variants of dextrose azide broth were prepared (one buffered) and the microorganisms selected were inoculated at a standardized concentration. Biomass increase was determined by measuring optical density in a spectrophotometer at 640 nm every 1 h. Microbiological evaluation of the culture medium was carried out using different microbial genera at different concentrations. Diagnostic and relative sensitivity, specificity and accuracy, and the Kappa index were determined for the culture medium. Glucose azide broth (Merck, Germany)ss production than the other genera...

Bases nutritivas para el cultivo de los microorganismos: parte 2 - principales indicadores de la calidad / Nutritive bases for the culture of microorganisms: Part 2 - main quality characteristics

Las bases nutritivas empleadas para el cultivo microbiano deben reunir una serie de características esenciales como aportantes de nutrientes, en especial, de componentes nitrogenados de origen proteico, tales como aminoácidos, péptidos y polipéptidos; macroelementos y microelementos, así como vitaminas y carbohidratos. Otro grupo de indicadores comprende características fisicoquímicas como pH, densidad aparente, propiedades organolépticas (color) y tecnológicas (rendimiento). Los índices biológicos y sanitarios son fundamentales para su funcionalidad en los medios, entre ellos, la reactividad biológica, que incluye la producción de indol, acetilmetilcarbinol y gas sulfhídrico y presencia de carbohidratos fermentables; el límite microbiano y la promoción del crecimiento de microorganismos específicos.

Nutritive bases for microbial growth, as nutrient sources, should comply with a group of essential characteristics, especially as sources of nitrogenous compounds derivedfrom proteins, such as aminoacids, peptides andpolypeptides, as well as sources of vitamins andcarbohydrates. Other group of characteristics includesphysico-chemical parameters such as pH, apparentdensity, organoleptic (color) and technological (yield)properties. Biological and sanitary characteristics are fundamentalfor their funcionality in culture media, amongthem, the biological reactivity that includes indole, acethylmethylcarbinol and hydrogen sulphide productionand the presence of fermentable carbohydrates, microbiallimit and the growth promotion of specific microorganisms.

Bases nutritivas para el cultivo de los microorganismos: parte 1 - Procesos tecnológicos / Nutritive bases for the culture of microorganisms: part 1 - Technological processes

Los medios de cultivo pueden ser definidos como conjuntos de elementos o sustancias que garantizan a los microorganismos u otras células los nutrientes necesarios para su conservación o desarrollo. Las bases nutritivas son ingredientes fundamentales de muchos de estos medios y aportan, para el crecimiento de los microorganismos, los compuestos nitrogenados de naturaleza proteica, tales como péptidos, polipéptidos, aminoácidos, vitaminas, carbohidratos y otros elementos nutritivos. Se obtienen mediante extracción o hidrólisis del material biológico, por diferentes vías, seguido de clarificación mediante la filtración, concentración, secado y tamizado. Especial interés ocupa la búsqueda de diferentes sustratos proteicos alternativos, debido al incremento de la frecuencia de los brotes de encefalopatía espongiforme bovina y fiebre aftosa en diferentes países, el peligro de transmisión de estas enfermedades al hombre a través de las proteínas derivadas de los sub productos de los animales y las regulaciones para el comercio, importación y uso de estos productos.

Culture media could be defined as a group of elements or substances, which provide, to microorganisms or toother cells, the necessary nutrients for their preservation or growth. Nutritive bases are main ingredients for muchof these media and they provide for the growth of microorganisms, protein derived nitrogen compoundssuch as peptides, polypeptides, aminoacids; vitamins, carbohydrates and other nutritive elements. They areobtained by extraction or hydrolysis of biological rawmaterial by different ways, and then undergo processesof clarification, filtration, concentration, drying andsieving. It is of great interest to identify different alternative protein substrates, due to the increase of Bovine Spongiform Encephalopathy and Aftose Feveroutbreaks in different countries, the possible spread ofthese diseases to humans by proteins derived from animalby-products and due to trading, importation and consumption regulations for these products.